显微镜的使用方法(显微镜的使用方法步骤视频教学)

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镜检，即显微镜检查是诊断鱼病的重要方法之一。有些鱼类病原体肉眼看不清或根本看不见，必须借助于显微镜、解剖镜或放大镜来诊断。如白头白嘴病是由细菌引起的，其症状是头、嘴发白，但又往往与车轮虫病并发。而患车轮虫病的病鱼中，有时也会有个别病鱼头部或嘴部出现轻微的灰白现象，容易被误认为是白头白嘴病。通过镜检，就能作出正确的诊断。

显微镜是由一个透镜或几个透镜的组合构成的一种光学仪器。是人类进入原子时代的标志。用于放大微小物体成为人的肉眼所能看到的仪器。显微镜的种类有很多，常见的有：光学显微镜、电子显微镜、探针显微镜等。我们普通人平常用的大多是光学显微镜。

一、显微镜的构造

1.物镜

该镜头下端接近被检物体，为显微镜上的主要装置。由多块透镜组成。一般显微镜具有3个-4个物镜，分成干燥系和油镜两组，干燥系又按放大倍数分为低倍镜和高倍镜。各物镜放大率由其外形辨认，镜头长度越大，镜片口径越小，放大倍数愈大；反之，放大倍数小。油镜头的下缘，一般刻有一圈黑线。此外，各物镜上都刻有放大倍数、孔径数等标志

2.目镜

目镜和镜检者的眼睛接近。目镜由两块透镜组成，其上刻有倍数。为便于指出物象，常在镜中装黑色细丝一条，作为指针。

3.聚光器

聚光器位于载物台下方的次台上，由数个透镜组成。能上下移动，调节并集聚由光源提供的光线，使集中于载物玻片上。

4.光源

光源提供观察所需光线，装在显微镜的最下方。

5.镜臂

镜臂在镜筒后面，便于显微镜搬移，并作为将镜筒倾斜时的握持部。

6.底座

显微镜的底座用以支持全镜，呈马蹄形。

7.载物台

在物镜下方，呈方形或圆形，用以载放被检物体。中央有孔，可以透光。台上装有一弹簧夹，镜检时可以固定标本片。有的载物台上装有载物台调解旋钮，捻转旋钮，能使标本前后左右移动。

8.光圈

在聚光器下方，可以任意开闭，用以调节射入集光线的多寡。

9.电源和亮度调节旋钮

用于开启光源和调节光源的亮度。

10.粗准焦螺旋和细准焦螺旋

粗准焦螺旋可使载物台较大距离地升降。细准焦螺旋可以精确地调节距离。

二、显微镜的使用方法

（一)调光

(1)镜检时身体要正对实验台，采取端正的姿态，调整两个目镜之间的距离与观测者瞳距相符，两眼自然睁开，同时左手调节焦距，使物像清晰并移动标本视野，右手记录、绘图。将低倍物镜转至镜筒下方与镜筒成一直线。镜检时载物台不可倾斜，因为当载物台倾斜时，液体或油易流出，既损坏了标本，又污染载物台，也影响检查结果。

(2)利用自然光源镜检时，最好用朝北的光源，不宜采用直射阳光；利用人工光源时，用日光灯的光源。转动底部光源或拨动反光镜，调节视野亮度。反光镜有平、凹两面，光源强时用平面，较暗时用凹面，需要强光时，将聚光器提高，光圈放大；需要弱光时，将聚光器降低，或光圈适当缩小。

(3)将待观察的标本置载物台上，载物台上有固定的装置固定标本。通过载物台调节旋钮将标本移至镜筒下方。转动粗准焦螺旋使镜筒下降至物镜 镜接近标本。于转动粗准焦螺旋的同时，需俯身在镜旁仔细观察物镜与标本之间的距离。

(4)调节目镜之间距离，双眼分别于左、右目镜中观察，待双眼视野重合，同时左手转动粗准焦螺旋，使镜筒徐徐上升以调节焦距，使视野内的物像看到时即停，再调细准焦螺旋，至标本清晰为止。

(二)物镜的使用

显微镜一般具有三个物镜，即低倍、高倍及油镜，固定于物镜转换盘孔中。观察标本时，使用低倍物镜，此时，视野较大，标本较易查出，但放大倍数较小(一般放大100倍)，较小的物体不易观察其结构。高倍物镜放大的倍数较大(一般放大400倍)，能观察微小的物体或结构。油镜放大倍数可达1000倍，用来观察细菌。普通人使用低倍物镜即可。

(三)低倍、高倍、油镜头的识别

(1)标明放大倍数10×、40 ×、100 x，或10/0.25、40/0.65、 100/1.30。

(2)低倍镜最短，高倍镜较长，油镜最长。

(3)镜头前面的镜孔低倍镜最大，高倍镜较大，油镜最小。

(4)油镜头上常刻有黑色环圈，或“Oil"或“油”字

(四)低倍镜换高倍镜的使用方法

(1)光线调好后，捻转载物台调节旋钮寻找需要观察的标本。

(2)如标本的体积较小，不能清楚查看其构造因而不能确认时，则将标本移至视野中央，再旋转高倍物镜于镜筒下方。

(3)旋转细准焦螺旋至物象清晰为止。

(4)调节聚光器及光圈，使视野内的物象达到最清晰的程度。

(五)油镜的使用方法

(1)将光线调至最强程度(聚光器提高，光圈全部开放，亮度调节旋钮或光源放至最大）。

(2)将标本固定在载物台上，先把低倍镜调至视野最亮，并找到标本视野的适当位置，然后才能换用油镜。

(3)转动粗准焦螺旋使镜筒上升，滴香柏油1小滴(不要过多，不要涂开)于物镜正下方标本上。

(4)转动物镜转换盘，使油镜头于镜筒下方。

(5)俯身镜旁侧面，在肉眼的观察下，转动粗准焦螺旋使油镜头徐徐下降浸入香柏油内，轻轻接触玻片为止。但勿使两者相碰，防止损伤镜头或玻片。

(6)慢慢转动粗准焦螺旋，使油镜头徐徐上升至见到标本的物象为止。

(7)转动细准焦螺旋，使视野物象达到最清晰的程度。

(8)左手徐徐移动载物台调节旋钮，并转动细准焦螺旋以观察标本。

(9)标本观察完毕后，转动粗准焦螺旋将镜筒升起，取下标本玻片。立即用擦镜纸将镜头上的香柏油擦净，再用干净的擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭镜头，最后用干净的擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去。注意在擦镜纸擦拭时，要求顺着一个方向旋转擦拭，不能两个方向来回擦。

(六)观察

初学者应先用低倍镜观察，这是因为低倍镜视野的实际范围最大，易于发现目的物，将标本玻片放在载物台上(注意标本朝上)，并使标本位于物镜的正下方，转动粗准焦螺旋，同时从侧面观察，待物镜下降到标本约0.5厘米时，开始由目镜观察，同时用粗准焦螺旋升起镜筒，直到出现物象后，改用细准焦螺旋，上下微微转动，仔细调节焦距，直至最后获得清晰的物象为止。如此时视野里所观察到的部位不理想时，可利用载物台调节旋钮将最适合的部位移动到视野中央。

由低倍镜转换到高倍镜时，一定要从侧面注视，以防低倍镜未对好焦距而造成镜头与玻片相撞，另外要用手指捏住转换器下面的金属盘使之旋转，而不得用手指捏住物镜来转动，否则长期使用后，会使光轴歪斜。调节光圈和聚光镜，使亮度适中，再仔细转动细准焦螺旋，调节焦距，获得清晰物象。

细菌或其他标本的细微结构，都需要用油镜观察，由于油镜的工作距离很短(0.19毫米左右)，故使用时必须特别小心。在低倍镜找到要观察的部位以后，将镜筒升高，在标本上加一滴香柏油，转换镜头，从侧面注视，用粗准焦螺旋将镜筒小心下降，使油镜浸入油滴，直到几乎与标本接触为止(注意切勿压在标本上，以免压碎玻片，甚至损坏油镜镜头)。从目镜观察，先用粗准焦螺旋徐徐升起(只准上升镜筒，不能向下调节)，当视野中有模糊的标本物象时，改用细准焦螺旋调节，直到标本物象清晰为止，如转动粗准焦螺旋已使镜头离开油镜，应重新调节，直至调到看清物象为止。

三、鱼体镜检的正确操作

用显微镜、解剖镜、放大镜对鱼病进行检查，简称镜检。镜检是在鱼病情况比较复杂，仅凭肉眼检查原则上是不能作出正确诊断时而开展的更进一步的检查工作。在一般情况下，鱼病往往错综复杂，很多病原体十分细小，有必要进行镜检。

镜检的方法是将从病变部位取少量的组织或粘液置于载玻片上，如是体表和鳃的组织或粘液，应加上少量普通洁净水或生理盐水；是内脏组织则用生理盐水或洁净水，然后盖上盖玻片，并稍加压平，于显微镜下进行观察，先用低倍镜检查，当发现有虫体构造看不准时，再换中倍镜或高倍镜检查。

玻片从左到右，移下一小格，再从右往左，自上而下周而复始地移动，直至整个玻片看完，记下寄生虫的种类和数量。少量寄生虫并不引起鱼病，但若随意在一个玻片上观察3个视野记数，平均每个视野有20个左右，就应引起注意。

总之，在整个检查过程中，应把检查到的情况，结合鱼病流行季节、各阶段发病规律进行分析比较，找出其原因，作出诊断，然后根据各种病的防治方法，对症下药，及时总结。

四、检查时应注意的事项：

1.用活的病鱼或刚死的病鱼。迅速送到实验室进行检查。因时间稍长，鱼体腐烂就很难正确论断。

2.取样时要保持鱼体湿润。因鱼体干燥后，病鱼的症状也会变得不明显。因此，应将病鱼装在带有原饲养水的桶或盆里拿出检查。

五、检查方法

（1）载玻片法

取下一小块病灶组织或一小滴内含物，放在干净的载玻片上，滴入一小滴清水或盐水，盖上盖玻片，轻轻地压平，先在低倍显微镜下检查，分辨不清或可疑的可再用高倍镜检查。

（2）玻片压缩法

用两片厚度约为3～4毫米，大小约6×12厘米的玻片，先将要检查的组织或者是器官的一部分以及粘液等，放在其中一片玻片上，滴上适量的清水或生理盐水，用另一片玻片将其压成透明的薄层，即可放到解剖镜或低倍显微镜下检查。

六、镜检应该重点检查的组织器官

鱼的各个组织器官、血液都可能有病原体存在，但在生产实践中，特别应该重点检查的部位是粘液、鳍条、鳃、肠胃、肝脏等部位。

（1）粘液

在鱼的体表粘液中，往往有许多肉眼看不见的病原体，如颤动隐鞭虫、口丝虫、车轮虫以及吸虫囊蚴等，粘孢子虫和小瓜虫的孢囊肉眼也不易区分。在检查时，先用解剖刀刮取鱼体表的粘液，然后按照镜检方法将粘液放到显微镜或解剖镜下观察。

（2）鳃

用剪刀从左右鳃各剪取第一鳃两端和中间三个点的鳃组织，放在载玻片上，滴入适量的清水，盖上盖玻片在显微镜下观察；然后再刮取鳃片上的粘液或可疑物，同样按上述方法进行检查。可发现鳃隐鞭虫、波豆虫、车轮虫、黏孢子虫、肤孢虫、斜管虫、小瓜子虫、杯体虫、毛管虫、指环虫等寄生虫。鱼的鳃是特别容易被病原体侵袭寄生的部位，取鳃组织时，最好从每一边鳃的第一片鳃片接近两端的位置剪取一小块，寄生虫大多在鳃小片的这两个位置上寄生。

检查粘细菌可取鳃腐烂处旁边的组织，取下后放载玻片上，加清水静置10—15分钟后检查(因为粘细菌离开寄主后会聚集在一起)，容易看到粘细菌。

（3）鼻腔

用吸管吸取少许清水注入鼻孔中，再用镊子或微吸管从鼻腔内取少许内含物或将液体吸出，放入培养皿中(要多吸几次)，或置于显微镜下检查，用低倍显微镜或解剖镜观察。可发现黏孢子虫、车轮虫等原生动物。

（4）血液

从鳃动脉或心脏取血。血液镜检可以发现锥体虫等原生动物寄生虫。

（5）口腔

用镊子刮取上下颚的粘液在显微镜下检查。若是检查白头白嘴病，刮下吻部周围的粘液也要过10—15分钟后再观察。

（6）眼

用弯头镊取出鱼眼睛，放于玻片上，剖开巩膜，释出玻璃体和水晶体，在低倍显微镜下或解剖镜下检查，可发现双穴吸虫的囊蚴和黏孢子虫等。

（7）体腔（腹腔）

打开体腔，剖开鱼体，取出所有内脏后用洁净水或生理盐水自上而下冲洗腹腔，用平皿盛装冲洗液，稍加搅动，倒去上层清水，下沉水与沉淤物用吸管吸到载玻片上，逐次检查。发现有白点，用解剖镜或显微镜检查，可发现黏孢子虫、微孢子虫、绦虫等成虫和囊蚴。

（8）肌肉

剥去鱼体皮肤后，先在前、中、后等部分取一小片肌肉放在载玻片上，盖上盖玻片，轻轻压平，在显微镜下观察，再用压缩法检查，可发现黏孢子虫、复殖吸虫、绦虫和线虫等幼虫。

（9）肠胃

检查鱼的肠胃，首先应把肠道外壁上所有的脂肪组织尽量去除干净，否则不易进行观察。目检肠道外形，若肠道外壁上有许多小白点，通常是粘孢子虫或微孢子虫的孢囊。肉眼检查完后，一般是将肠道分为前肠、中肠和后肠三段，分别进行检查。用尖剪在与肠平行的方向剪开一个小切口，用镊子从切口取一小滴内含物放载玻片上。滴上一小滴生理盐水，盖上盖玻片，压片镜检，可发现鞭毛虫，变形虫、黏孢子虫、微孢子虫、球虫和纤毛虫等原生动物。六鞭毛虫、变形虫和肠袋虫一般寄生在后肠近肛门3～7厘米处，而复殖吸虫、绦虫、线虫和棘头虫等通常在胃、前肠或中肠寄生。

检查时除了注意发现较大型的寄生虫外，还应注意肠内壁上有无白色点状物或瘤状物，有无溃烂发红发紫的现象。如果有小白点，压破其孢囊，往往可以看到大量的粘孢子虫，有时也会是微孢子虫。青鱼肠里溃烂或有白色瘤状物，往往是球虫的大量寄生。如果发红发紫，则一般是细菌性肠炎。

（10）肝脏

检查鱼的肝脏，先肉眼观察肝脏的颜色有无变化，有无溃烂、病变、白色和肿瘤等。在肝的表面，有时可发现复殖吸虫的孢囊或虫体，有的则有粘孢子虫、微孢子虫或球虫形成的孢囊的小白点。然后取少许肝组织，放在载玻片上，盖上盖玻片，轻轻压平，先在低倍镜下观察，然后再用高倍镜观察，通常在病鱼肝脏上可发现粘孢子虫，微孢子虫等的孢子或胞囊，有时还有吸虫的囊蚴。

（11）胆囊

鱼的胆囊壁和胆汁，除用载玻片法在显微镜下检查外，还要用压展法或放在培养皿里用解剖镜或低倍显微镜观察。胆囊内可发现六鞭毛虫、黏孢子虫、微孢子虫、复殖吸虫和绦虫幼虫等。

取胆囊时要特别小心，切勿弄破，取出后放培养皿中，目检后取一部分胆囊壁放载玻片上，盖上盖玻片，压平，放显微镜下观察。检查胆汁时用吸管吸取胆汁，在镜下作载玻片法检查。

（12）鳔

检查鱼鳔用载玻片法和压展法同时检查，可发现复殖吸虫、线虫、黏孢子虫及其胞囊。

七、镜下观察病原体的计数方法

镜检时，除了解病原体的种类和对寄主的感染率(%)外，还要了解它们对寄主的感染强度，因而对每种病原体的数量要进行统计。

其方法与标准是：细菌：肠炎、烂鳃、蛀鳍、赤皮病、疖疮等按表现的症状，用文字描述。

真菌：水霉、鳃霉，按照对器官的比例大小，用文字和数字说明。原生动物：这类病原体用肉眼难于观察到，镜下观察一般也不可能逐个数清，因而采用估计法以“+”来表示，“+”表示有，“++”表示多，“+++”表示很多。

其中：

鞭毛虫、变形虫和孢子虫的孢子，在高倍镜一个视野下有1—20个虫体记“+”号，20—5b个虫体记；“++”号，虫体51个以上记“+++”号，并注明是以孢子计算的。

纤毛虫、吸管虫庄低倍镜一个视野下有1—50个记“+”号，51—100个记“++”号，100个以上记“+++”号。

小瓜虫可按孢子虫的标准统计。

以上每—种统计数，都以任取放大同倍数的3个视野中观察到虫体的均值表示。

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